Determinación del balance de reguladores de crecimiento en la inducción de callos a partir de anteras de cacao (theobroma cacao l.) en los cultivares ics-95 e imc-67
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Date
2014
Authors
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Publisher
Universidad Nacional Agraria de la Selva
Abstract
La presente investigación se realizó el Laboratorio de Micropropagación in
vitro de la Facultad de Agronomía de la Universidad Nacional Agraria de la Selva
(UNAS), distrito de Rupa Rupa, provincia de Leoncio Prado, departamento de
Huánuco, región Andrés Avelino Cáceres; con la finalidad de determinar el
balance de reguladores de crecimiento para la obtención in vitro de callos a partir
de anteras de cacao (Theobroma cacao L.) en los cultivares ICS-95 e IMC-67.
Se utilizaron los estambres obtenidos de los botones florales cerrados de dos
cultivares de cacao (ICS-95 e IMC-67), colectados en Noviembre del 2012 en el
Banco de Germoplasma de Cacao de la UNAS.
Los tratamientos experimentales consistieron en la interacción de dos
factores A y B, siendo el primero, pre-tratamientos con frio y el segundo la
combinación de hormonas, utilizándose el DCA con arreglo factorial 3A5B con 10
repeticiones y la prueba de Duncan (α = 0.05).
Se colectaron 30 flores inmaduras en estado de botón floral por cada cultivar
de cacao entre las 8:00 y 9:00 de la mañana, con el fin de evitar la apertura de los
botones, después de aislados del árbol. Seguidamente los botones fueron
colocados en un recipiente estéril y llevados al laboratorio, donde se utilizaron dos
tipos de medio de cultivo, para los pre-tratamientos el medio MS/2 líquido y para
los ensayos con balance hormonal, el MS/2 semisólido. Los medios de cultivo se
ajustaron a un pH de 5.7, antes de ser autoclavados.
Los botones florales fueron desinfectados en cámara de flujo laminar, con
alcohol al 70% por 1 minuto e hipoclorito de sodio al 1% más tres gotas de Tween
20, durante 5 minutos. Se guardaron cinco botones florales por placa Petri con el
medio MS/2 líquido, obteniendo 4 placas Petri que fueron sometidas a los pretratamientos.
Transcurrido el tiempo de los pre-tratamientos, los botones florales fueron
seccionados con un bisturí estéril y los sépalos fueron separados para extraer la
concha petaloide y obtener los estambres con mayor facilidad. Los estambres, se
sembraron en tubos de ensayo que contenía el medio MS/2 semisólido con el
balance hormonal correspondiente a cada tratamiento, que consistió de 10 tubos
de ensayo con 1 antera cada uno, mantenidos en oscuridad a 25ºC y evaluados
semanalmente hasta la expresión de la callogénesis con estructuras
proembrionarias.
Las evaluaciones se realizaron durante 23 semanas por separado en ambos
cultivares cacao. Se evaluó tiempo y porcentaje de aparición de callos, crecimiento
del callo, tipo de aparición de callos, contaminación bacteriana y fúngica,
necrosamiento, presencia de organogénesis y albinismo.
El mejor regulador de crecimiento fue el T4 (15 ppm de 2,4-D, 3 ppm de AIA y
5 ppm de ANA) con 10 callos, seguido del T3 (10 ppm de 2,4-D, 3 ppm de AIA y 5
ppm de ANA) con 8 callos y por último el T0 (0 ppm de AIA y 0 ppm de ANA) con 5
callos, correspondientes al cultivar IMC-67.
Las respuestas más altas en la formación de callos embriogénicos en las
anteras de ambos cultivares se consiguió con el primer pre-tratamiento a1 (sin frío
por ninguna semana) y con una combinación de hormonas b5 (15 ppm de 2,4-D, 3
ppm de AIA y 5 ppm de ANA).
En ambos cultivares se encontraron diferencias en la obtención de callos a
partir de las anteras. Los valores más bajos se observaron en ICS-95 con 22
callos y los más altos en IMC-67 con 38 callos. En la obtención de callos
embriogénicos, se observaron valores de 5 en ICS-95 y 11 en IMC-67.
La pérdida de explantes por necrosamiento fue mayor en ICS-95 (18
explantes necrosados) y menor en IMC-67 (16 explantes necrosados). La
contaminación por bacterias del ICS-95 (3 explantes con bacterias) fue más bajo
que en IMC-67 (5 explantes con bacteria).
De los factores estudiados, los más importantes fueron: genotipo, pretratamiento, combinación de hormonas con diferentes niveles de 2,4-D.
Description
Keywords
Cacao, Biología floral, Genotipo, Biotecnología en cacao